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?低表达 hlf 可能通过营养代谢途径促进 nsclc 细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。
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?然而，上调 hlf 抑制 nsclc 的生长，而沉默 hlf 可促进 nsclc 细胞的锚定和悬浮生长能力(图4a和b)，表明沉默 hlf 增强了 nsclc 细胞在悬浮条件下的生存能力，即 anoikis 耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。
?事实上，昼夜节律基因的失调导致了 nsclc 的代谢失调，hlf 广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。
?在低血清(1%)和低葡萄糖(1g/l)培养液组成的低营养条件下，hlf 过表达抑制了
nsclc 细胞的增殖，但增加了凋亡潜能，反之亦然（图4c-e）。
? hlf 参与了癌细胞生长培养基的营养代谢，这是 hlf 抑制 nsclc 细胞生长的前提条件。
?在低营养条件下观察 nsclc 细胞 hlf 对葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的影响。如补充图6a，hlf 表达的改变并不影响总蛋白含量。然而，hlf 的上调降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了游离脂肪酸的水平(图4f–i)。
?矛盾的是，上调 hlf 增加了细胞内 atp 的总产生和 ldh 的活性(补充图6b和c）。这些发现表明，在低营养条件下，过表达 hlf 的癌细胞更容易发生有氧代谢而不是厌氧代谢，这进一步支持了上调 hlf 降低乳酸脱氢酶(ldh)的活性，厌氧糖酵解限速酶，一些厌氧糖酵解和乳酸发酵相关基因，但增强了多个三羧酸循环相关基因(。
?相反，沉默 hlf 则表现出相反的代谢特性，促进了 nsclc 细胞的厌氧代谢(图4f-i和补充图6c和d)。上诉结果表明，低表达hlf促进非小细胞肺癌细胞的厌氧代谢。
?事实上，即使在氧含量正常的情况下，癌细胞也表现出葡萄糖代谢特征的改变，更倾向于无氧代谢，这一现象被称为“瓦伯格效应”。综上所述，我们的结果表明，低表达 hlf 可促进 nsclc 细胞从三羧酸循环向厌氧代谢的首选代谢途径的转换，从而进一步促进细胞在低营养条件下的生长。
?为了进一步确定低营养条件下 hlf 抑制 nsclc 生长和转移的潜在机制，我们将多个信号通路的荧光素酶报告质粒转染到nsclc细胞中。如图5a所示，上调 hlf 显著增强了 nsclc 细胞 ppar 信号活性，抑制了nf-kb信号活性;相反，沉默 hlf 则产生相反的效果(图5a)。
?基于 tcga 的 nsclc 数据集中 hlf 的表达进行了基因集富集分析(gsea)，结果显示 hlf的表达水平与 ppar 信号呈正相关，而与 nf-kb 信号呈负相关。根据 gsea 分析，hlf 表达与脂质氧化和糖酵解显著相关(补充图6f)。
?重要的是，一些证据表明，hlf 通过增加脂解诱导的游离脂肪酸积累，参与 ppar 的易位和激活，通过破坏 p65 与靶 dna 的结合，nf-kb 信号通路广泛参与了癌症的进展和转移。ppar 信号通路由 pparα、pparβ/δ和 pparγ等几个家族成员组成。因此，确定参与 hlf 抑制 nf-kb 信号通路以及 nsclc 肿瘤发生和转移的特异性 ppar 成员至关重要。
?首先，检测10对 nsclc 组织中pparα、pparβ/δ和 pparγ的表达水平。如补充图6g和h，pparα在4/10对组织中表达显著下调，pparγ在8/10对表达，而pparβ/δ在8/10对组织中表达上调。已有广泛报道称 pparα和 pparγ在 nsclc 中起肿瘤抑制信号的作用，而据报道 pparβ/δ对起致癌作用。
? western blot 分析一致显示，hlf 的上调增加了 pparα和 pparγ的总表达和核易位，增加了ikbα的表达，但降低了磷酸化的 nf-kb 和 p65 的总水平和核水平。相反，沉默 hlf 则发挥了相反的作用。因此，我们的研究结果表明，hlf 在 nsclc 中激活 pparα和 pparγ，抑制 nf-kb/p65 信号通路。
?我们使用 pparα激动剂非诺贝特、pparγ激动剂吡格列酮和 nf-kb 信号抑制剂ly2409881，进一步研究了 pparα/pparγ/nf-kb/p65 信号轴在 hlf 在 nsclc 细胞中的功能作用中的意义。
?我们的结果显示，在 hlf 沉默的细胞中，非诺贝特和吡格列酮显著上调了 ppar 的活性，而 ly2409881 则没有上。
?然而，非诺贝特、吡格列酮和 ly2409881 差异降低了 hlf 沉默细胞中 nf-kb 信号的活性。
?重要的是，非诺贝特、吡格列酮和 ly2409881 减弱了 hlf 下调对细胞非锚定生长和抗缺氧能力的刺激作用。相反，非诺贝特、吡格列酮和 ly2409881 逆转了低营养条件下hlf下调对 nsclc 细胞的促增殖（克隆生长）和抗凋亡作用